在细胞培养的领域，细胞通常被划分为两类：贴壁细胞和悬浮细胞。贴壁细胞需要附着在培养皿上才能生长，而悬浮细胞则能够在液体培养基中自由漂浮和增殖。看似贴壁细胞需要考虑培养皿的表面性质以及是否使用胶原蛋白和多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）等物质来增强附着性，但如果你认为“悬浮细胞就永远不需要包被”，那你可能被它们飘逸的外表所误导。实际上，在某些关键实验操作中，悬浮细胞也可能需要暂时“靠岸”，甚至依赖包被表面的帮助。今天，我们将探讨悬浮细胞为何在某些情况下也需要包被，以及如何正确实施包被，以达到最佳实验效果。

1. 悬浮细胞并非永远不附着

在细胞培养中，悬浮细胞并不意味着它们在整个生长过程中都保持漂浮状态。在某些实验条件下，悬浮细胞确实需要短暂地附着在表面上，以提高实验效果。

2. 什么是多聚赖氨酸（PLL）包被？

多聚赖氨酸（poly-L-lysine, PLL）是一种人工合成的阳离子多肽，拥有丰富的氨基基团，整体带有强正电荷。由于细胞膜表面通常带负电，PLL通过静电作用将细胞“吸附”在表面，广泛应用于以下领域：

• 培养初代神经元和干细胞等难以附着的细胞
• 组织切片或细胞爬片的固定
• 增强某些表面抗体或细胞的结合力

在贴壁细胞中，PLL包被可以提升细胞附着的速度与均匀性。而在悬浮细胞中，则主要用于短期固定及与功能性实验相结合。

3. 悬浮细胞需要包被的常见场景

悬浮细胞在以下几个场景中可能需要包被：

1. 免疫荧光成像与免疫染色：在普通培养皿中操作悬浮细胞时，容易在洗涤过程中造成细胞损失。通过将细胞置于PLL包被的玻片或培养皿中，可以实现短暂固定，提高图像的稳定性与信噪比。
2. 电转染后的细胞收集：电转后的悬浮细胞往往较为脆弱，直接离心可能导致大量细胞损失。在PLL包被的板底上短暂培养4-6小时后再进行细胞回收，有助于提高转染效率与存活细胞比例。
3. 细胞富集或原位功能检测：某些实验（如ELISPOT、细胞毒性检测）需要“原位”观察反应，对细胞分布和位置的稳定性要求较高，PLL包被可以帮助固定悬浮细胞。
4. 低密度悬浮细胞培养中的聚团问题：在低密度培养中，悬浮细胞可能因为游离过快而无法扩增。适当的包被可提供锚点，减少细胞间的漂浮干扰。
5. 外泌体/病毒收集实验中的细胞定点处理：在研究外泌体时，为保持细胞的稳定状态，有时会选择使用轻度PLL包被固定悬浮细胞，以保证上清液成分的一致性。

4. 如何正确使用PLL包被？

包被悬浮细胞的目的并不是为了让它们像贴壁细胞一样长期生长。大多数情况下，包被的主要目的在于：

• 实验窗口期的短暂固定
• 提高操作效率与成像质量
• 增强细胞在特定实验平台上的一致性

长时间的附着可能会影响细胞状态，甚至改变其生物学特性，因此必须根据实验目标合理设置处理时长和强度。

5. 什么时候不应使用包被？

并非所有悬浮细胞实验都需要包被。在以下情况下应避免使用包被：

• 长期培养的悬浮细胞工艺（如293F在生物反应器中）不适合加包被，反而应使用低附着力培养皿。
• 需要完全无附着状态的实验（如某些免疫学流式功能检测、抗体介导的细胞毒性测试），包被可能影响结果的真实性。

总结

悬浮细胞在某些时刻也需要“靠岸”。无论是进行成像、细胞收集、固定还是维持操作稳定性，适当的表面包被（如尊龙凯时的PLL）能够显著提升实验成功率和数据质量。然而，悬浮并不意味着永远漂浮，科学实验强调适时适地，而包被则是在其中至关重要的技巧。